ABSTRACT
Abstract Background: Multidrug-resistant bacteria present in food of animal origin raise human and animal health concerns. Objective: To assess antimicrobial resistance of Escherichia coli isolates from sheep carcasses subjected to spray-chilling with water (4 and 10 hours) during cooling. Methods: Thirty surface swabs were collected from carcasses before and after the last water spray in two slaughter periods. In a first assessment (1st sampling), three spray-chilled carcasses (4 hours), three non-sprayed and one control carcass were sampled. In a second assessment (2nd sampling), the same number of carcasses and treatments were maintained, but spray-chilling was extended to 10 hours. All samples collected were isolated and submitted to susceptibility test using 16 (1st sampling) and 17 (2nd sampling) antimicrobials, respectively. Results: Overall, E. coli isolates were resistant most antimicrobials. Spray-chilled and control carcasses (10 hours) showed resistance to meropenem. Conclusion: E. coli isolates from carcasses subjected to spray-chilling with water for 10 hours had higher antimicrobial resistance to one, two, and four antimicrobial classes, characterizing a multidrug resistance profile. These results highlight the need to monitor health status throughout the meat production processes.
Resumen Antecedentes: las bacterias multirresistentes presentes en alimentos de origen animal son motivo de alerta para la salud humana y animal. Objetivo: verificar la resistencia a antimicrobianos de aislados de Escherichia coli en canales ovinas sometidas a aspersión (4 y 10 h) durante la refrigeración. Métodos: Luego de dos faenas de sacrificio, treinta hisopos fueron colectados en la superficie de las canales antes y después de la última aspersión. En un primer sacrificio (1era colecta) se recolectaron muestras de tres canales sometidas a aspersión (4 horas), tres sin aspersión y una canal como control. En un segundo sacrificio (2da colecta), el mismo número de canales y tratamientos se mantuvo, y el período de aspersión se extendió a 10 horas. Las muestras recogidas fueron aisladas y sometidas a la prueba de susceptibilidad utilizándo 16 (1.ª colecta) y 17 (2.ª colecta) antimicrobianos, respectivamente. Resultados: los aislamientos de E. coli fueron, en general, resistentes a las principales clases de antimicrobianos. Las canales con aspersión y el control (10 h) presentaron resistencia al meropenem. Conclusión: cuando la asperción duró 10 h, los aislados de E. coli presentaron mayor resistencia para una, dos y cuatro clases de antimicrobianos, es decir, fueron multirresistentes a los fármacos utilizados. Esto resalta la necesidad de monitorear el estado de salud durante todos los procesos de producción de carne.
Resumo Antecedentes: bactérias multirresistentes presentes em alimentos de origem animal são motivo de preocupação e alerta na saúde humana e animal. Objetivo: verificar a resistência antimicrobiana em isolados de Escherichia coli de carcaças de ovinos pulverizadas ou não (4 e 10 horas) durante a refrigeração. Métodos: foram coletados trinta swabs de superfície em carcaças antes e após a última aspersão em dois abates. Em outubro do 2015, três carcaças aspergidas foram amostradas, três sem aspersão e uma carcaça para controle, por um período de 4 horas. Em julho de 2016 (2ª coleta), o mesmo número de carcaças e tratamentos foram mantidos e o período de aspersão foi prolongado em 10 horas. As amostras coletadas foram isoladas e submetidas ao teste de susceptibilidade em 16 (1ª coleta) e 17 (2ª coleta) antimicrobianos, respectivamente. Resultados: isolados de E. coli foram, em geral, resistentes às principais classes de antimicrobianos. As carcaças e o controle aspergidos (10 h) apresentaram resistência ao meropenem. Conclusão: quando a aspersão de água durou 10 horas, os isolados de E. coli apresentaram maior resistência antimicrobiana a uma, duas e quatro classes de antimicrobianos, o que é uma multirresistência aos fármacos testados. Isso alerta para a necessidade de monitorar os aspectos de saúde durante todos os processos de produção de carne.
ABSTRACT
As características fenotípicas [morfológicas, bioquímicas, susceptibilidade aos antimicrobianos, índice de resistência múltipla aos antimicrobianos (IRMA), concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) da benzilpenicilina] de 38 isolados de Streptococcus equi oriundos de amostras clínicas de animais com adenite equina foram alvo deste estudo. A fenotipia demonstrou três padrões de colônias, três biotipos de fermentação de carboidratos e variação de 0 a 0,4 no IRMA. Todos os isolados de S. equi demonstraram sensibilidade à penicilina, tanto pelo método de disco difusão quanto pelo método de microdiluição. A CIM e CBM média de benzilpenicilina foi de 0,0095μg/mL e 0,0267μg/mL para S. equi subesp. equi e de 0,0128μg/mL e 0,0380μg/mL para S. equi subesp. zooepidemicus. Os valores de CIM e CBM diferiram entre as subespécies (p<0,05). O diâmetro do halo de inibição de penicilina demonstrou relação com a CIM (ì=0,03638 - 0,00072x) para S. equi subesp. equi. Também foi demonstrada relação entre o diâmetro do halo de inibição de penicilina com a CBM para S. equi subesp. equi (ì=0,10931- 0,00223x). Entretanto para as amostras de S. equi subesp. zooepidemicus esta relação somente foi verificada para a CBM (ì=0,1322 - 0,00271x). A CIM de benzilpenicilina frente às amostras isoladas da região Central, Planalto e Sul do estado do Rio Grande do Sul foram estatisticamente semelhantes, mas diferiram do isolado do estado do Paraná, sugerindo o caráter atípico desta cepa. Todos os isolados de S. equi são sensíveis à penicilina e sulfazotrim, confirmando a eleição destes antimicrobianos para o tratamento das infecções por este agente na clínica veterinária. Os resultados obtidos não dispensam a utilização prudente dos antimicrobianos.
Phenotypic characteristics [morphology, biochemical fermentation, antimicrobial susceptibility, index of multiple resistances to antimicrobials (IMRA), minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of benzilpenicillin] of 38 Streptococcus equi isolates from clinical samples of horses with strangles were the aim of this study. The phenotypic analyses demonstrated three colony patterns, three carbohydrate fermentation biotypes and IMRA variation from 0 to 0.4. All the isolates of S. equi demonstrated sensitivity to penicillin, both by the disc diffusion method and microdilution method. The average MIC and MBC for benzilpenincillin were of 0.0095μg/mL and 0.0267μg/mL for S. equi subsp. equi and of 0.0128μg/mL and 0.0380μg/mL for S. equi subsp. zooepidemicus. The values of MIC and MBC differed between the subspecies (p<0.05). The diameter of penicillin inhibition halo demonstrated a relation with the MIC (ì=0.03638 - 0.00072x) for Streptococcus equi subsp. equi. A relation between the diameter of the inhibition halo of penincillin was also observed with the MBC for S. equi subsp. equi (ì=0.10931 - 0.00223x). However for the samples of S. equi subsp. zooepidemicus this relation was only verified with the MBC (ì=0.1322 - 0.00271x). The MIC of benzilpenicillin of the samples isolated from the Central, Planalto and South regions of Rio Grande do Sul were statistically similar, although different from the Paraná state sample, suggesting the atypical character of this strain. All the S. equi isolates are sensitive to penicillin and sulfazotrim, confirming these as antibiotics of choice for the treatment of infections caused by this agent in the clinical veterinary practice. The results obtained do not discard the prudent use of antimicrobials.
Subject(s)
Animals , Horses/classification , Streptococcus equi/pathogenicity , PhenotypeABSTRACT
Bovine genital campylobacteriosis is a common venereal disease of cattle; the prevalence of this disease can be underestimated mostly because of the nature of the etiological agent, the microaerobic Campylobacter fetus subspecies venerealis. The purpose of the current study was to evaluate the utilization of polymerase chain reaction (PCR) in the diagnosis of genital campylobacteriosis in samples obtained from bull prepuce aspirate, cow cervical mucus, and abomasum contents of aborted fetuses, collected into enrichment medium. Five different DNA extraction protocols were tested: thermal extraction, lysis with proteinase K, lysis with guanidine isothiocyanate, lysis with DNAzol, and lysis with hexadecyltrimethylammonium bromide (CTAB). The specificity, sensitivity, and technical application of the PCR assay were also evaluated with clinical samples and compared to bacterial isolation by standard culture. DNA extraction by the CTAB protocol provided better results in PCR, and it was able to detect 63 colony-forming units per ml of C. fetus. Out of 277 clinical samples tested, 68 (24 percent) were positive for Campylobacter fetus using PCR, while only 8 (2.8 percent) of the samples were positive by bacterial isolation in solid medium, proving the superiority of the PCR technique when compared to the standard isolation method, and providing evidence for its usefulness as a better screening test in cattle for the diagnosis of bovine genital campylobacteriosis.
Campilobacteriose genital bovina é uma doença venérea comum em bovinos. A prevalência desta doença pode ser subestimada na maioria das vezes pela natureza microaeróbica do agente etiológico, Campylobacter fetus subspecies venerealis. O propósito do presente estudo foi avaliar a utilização da reação de polimerase em cadeia (PCR) no diagnóstico de campilobacteriose genital em amostras obtidas de aspirado prepucial de touros, muco cervical de vacas e conteúdo abomasal de fetos abortados, coletados em meio enriquecido. Cinco protocolos diferentes de extração de DNA foram testados: termo extração, lise com proteinase K, lise com guanidine isothiocyanate, lise com DNAzol e lise com hexadeciltrimetilamônio brometo (CTAB). A especificidade, sensibilidade e a aplicação da técnica da PCR foram também avaliadas com amostras clínicas e comparadas com bactérias isoladas por cultura padrão. DNA extraído pelo protocolo de CTAB demonstrou os melhores resultados na PCR, e foi capaz de detectar 63 unidades formadoras de colônias de C. fetus por ml de meio. Das 277 amostras clínicas testadas, 68 (24 por cento) foram positivas para Campylobacter fetus pela PCR, enquanto 8 (2,8 por cento) das amostras foram positivas por isolamento bacteriológico, provando a superioridade da técnica de PCR quando comparada com métodos padrão de isolamento, e fornecendo evidências de sua utilização como um teste de melhor projeção para diagnóstico em campilobacteriose genital bovina.
Subject(s)
Animals , Cattle , Polymerase Chain Reaction/methods , Polymerase Chain Reaction/veterinaryABSTRACT
A campilobacteriose venérea bovina, ocasionada principalmente pelo Campylobacter fetus subsp. fetus e Campylobacter subsp. venerealis, é transmitida através do coito ou por inseminação com sêmen contaminado. O propósito deste estudo foi determinar a susceptibilidade in vitro de isolados de C. fetus subesp. venerealis a agentes antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento clínico e de sêmen. Foram testadas duas cepas padrão, sendo uma de C. fetus subsp. fetus e outra de C. fetus subsp. venerealis, bem como 21 amostras de isolados clínicos de C. fetus subsp. venerealis. Os testes foram realizados conforme o método de Kirby-Bauer. A amostra padrão de C. fetus subsp. fetus demonstrou-se resistente à lincomicina, penicilina e ácido nalidíxico, enquanto a de C. fetus subsp. venerealis apresentou susceptibilidade a todos antimicrobianos testados, com exceção do ácido nalidíxico. Todas as amostras de C. fetus subsp. venerealis foram susceptíveis à amicacina, ampicilina, cefalotina, estreptomicina, gentamicina, penicilina e tetraciclina. Foi observada resistência de 42,86 por cento à lincomicina e 4,76 por cento a enrofloxacina, e de 100 por cento ao ácido nalidíxico. Ainda, 4,76 por cento apresentaram susceptibilidade intermediária à enrofloxacina, neomicina e polimixina B e 9,52 por cento à lincomicina. Os resultados evidenciaram a sensibilidade das amostras analisadas aos antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento clínico e do sêmen.